電泳技術簡介電泳法,是指帶電荷的供試品(蛋白質、核苷酸等)在惰性支持介質(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中,于電場的作用下,向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動,使組分分離成狹窄的區帶,用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。電泳技術的基本原理和分類在電場中,推動帶電質點運動的力(F)等于質點所帶凈電荷量(Q)與電場強度(E)的乘積。F=QE質點的前移同樣要受到阻力(F)的影響,對于一個球形質點,服從Stoke定律,即:F′=6πrην式中r為質點半徑,η為介質粘度,ν為質點移動速度,當質點在電場中作穩定運動時:F=F′即QE=6πrην可見,球形質點的遷移率,首先取決于自身狀態,即與所帶電量成正比,與其半徑及介質粘度成反比。除了自身狀態的因素外,電泳體系中其它因素也影響質點的電泳遷移率。電泳法可分為自由電泳(無支持體)及區帶電泳(有支持體)兩大類。前者包括Tise-leas式微量電泳、顯微電泳、等電聚焦電泳、等速電泳及密度梯度電泳。區帶電泳則包括濾紙電泳(常壓及高壓)、薄層電泳(薄膜及薄板)、凝膠電泳(瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠、聚丙烯酰胺凝膠)等。自由電泳法的發展并不迅速,因為其電泳儀構造復雜、體積龐大,操作要求嚴格,價格昂貴等。而區帶電泳可用各種類型的物質作支持體,其應用比較廣泛。本節僅對常用的幾種區帶電泳分別加以敘述。影響電泳遷移率的因素⒈電...
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電泳分析常用方法(一)醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙?;纬傻睦w維素醋酸酯。由該物質制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小,幾乎能完全消除紙電泳中出現的“拖尾”現象,又因為膜的親水性比較小。它所容納的緩沖液也少,電泳時電流的大部分由樣品傳導,所以分離速度快,電泳時間短,樣品用量少,5μg的蛋白質可得到滿意的分離效果。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。醋酸纖維素膜經過冰醋酸乙醇溶液或其它透明液處理后可使膜透明化有利于對電泳圖譜的光吸收掃描測定和膜的長期保存。⒈材料與試劑 醋酸纖維素膜一般使用市售商品,常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液,濃度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要點⑴膜的預處理:必須于電泳前將膜片浸泡于緩沖液,浸透后,取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液,不可吸得過干。⑵加樣:樣品用量依樣品濃度、本身性質、染色方法及檢測方法等因素決定。對血清蛋白質的常規電泳分析,每cm加樣線不超過1μl,相當于60-80μg的蛋白質。⑶電泳:可在室溫下進行。電壓為25V/cm,電流為0.4-0.6mA/cm寬。⑷染色:一般蛋白質染色常使用氨基黑和麗春紅,糖蛋白用甲苯胺藍或過碘酸-Schiff試劑,脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫酸染色。⑸脫色與透明:對水溶性染料最普遍應用的脫色劑是5%醋酸水溶液。為了長期保存或進行光吸收掃描測定,...
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電泳是指混懸于溶液中的樣品(有機的或無機的,有生命的或無生命的)電荷顆粒,在電場影響下向著與自身帶相反電荷的電極移動的現象。眾所周知,最先進的電腦和最精巧的機器人,也難以和螞蟻的精巧 程度相比。而且螞蟻還能傳宗接代,更是現代技術所望塵莫及的。而螞蟻的這些特性與核酸和蛋白質的結構與功能是分不開的。核酸(包括脫氧核糖核酸和核糖核酸)可降解成片段,還可進一步降解成核苷酸;蛋白質(包括酶和同工酶)多肽和氨基酸等都具有可電離的基團,基團在溶液中能吸收或者給出氫離子,從而成為電荷粒子;又由于電荷粒子的多少不等以及具有相同電荷的分子又有大有小,于是在不同的介質中,在電場影響下,它們移動的速度也不相同了。人們利用這種特性,用電泳的方法對上述物質進行定性及定量分析,或者將一定的混合物分離成各個組份以及作少量電泳制備。因為電泳技術的這種獨特功能,所以就成了分子生物學研究工作中不可缺少的重要分析手段,被廣泛應用于基礎理論研究、農業科學、醫藥衛生、工業生產、國防科研、法醫學和商檢等許多領域。醫學在醫院臨床檢驗中,利用電泳技術分析血清中的酶及同工酶,可以診斷腎病的綜合征、心絞痛、肝硬化、肝癌、多發生骨髓瘤、惡性腫瘤、乙型肝炎、慢性肝炎等疾??;分析血色素組份,可以判定血細胞的正常與異常;;測定體液中可能存在微生物、原蟲的特異性抗原成份,在抗原成份分離的基礎上,尋找所需的單克隆抗體等等。刑偵在公安、政法偵審工作...
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電泳的種類1、移動界面電泳:是將被分離的離子(如陰離子)混合物置于電泳槽的一端(如負極),在電泳開始前,樣品與載體電解質有清晰的界面。電泳開始后,帶電粒子向另一極(正極)移動,泳動速度最快的離子走在最前面,其他離子依電極速度快慢順序排列,形成不同的區帶。只有第一個區帶的界面是清晰的,達到完全分離,其中含有電泳速度最快的離子,其他大部分區帶重疊。2、區帶電泳:是在一定的支持物上,于均一的載體電解質中,將樣品加在中部位置,在電場作用下,樣品中帶正或負電荷的離子分別向負或正極以不同速度移動,分離成一個個彼此隔開的區帶。區帶電泳按支持物的物理性狀不同,又可分為紙和其他纖維膜電泳、粉末電泳、凝膠電泳與絲線電泳。3、等電聚焦電泳:是將兩性電解質加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中,當其處在低于其本身等電點的環境中則帶正電荷,向負極移動;若其處在高于其本身等電點的環境中,則帶負電向正極移動。當泳動到其自身特有的等電點時,其凈電荷為零,泳動速度下降到零,具有不同等電點的物質最后聚焦在各自等電點位置,形成一個個清晰的區帶,分辨率極高。4、等速電泳:是在樣品中加有領先離子(其遷移率比所有被分離離子的大)和終末離子(其遷移率比所有被分離離子的?。?,樣品加在領先離子和終末離子之間,在外電場作用下,各離子進行移動,經過一段時間電泳后,達到完全分離。被分離的各離子的區帶按遷移率大小依序排列在領先離子與終末離子的區...
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在外電場作用下,膠體微粒在分散劑中會向陽極或陰極作定向移動的現象。說明膠體微粒帶有電荷。如fe(oh)3膠體微粒帶陽電荷,在電場作用下,會向陰極移動。廣泛應用于陶瓷工業中黏土的凈化,工廠除塵和醫院臨床診斷等方面。電泳的過程電泳分為以下四個過程:1、電解(分解):在陰極反應最初為電解反應,生成氫氣及氫氧根離子OH ,此反應造成陰極面形成一高堿性邊界層,當陽離子與氫氧根作用成為不溶于水的物質,涂膜沉積,方程式為:H2O→OH+H2、電泳動(泳動、遷移):陽離子樹脂及H+ 在電場作用下,向陰極移動,而陰離子向陽極移動過程。3、電沉積(析出):在被涂工件表面,陽離子樹脂與陰極表面堿性作用,中和而析出不沉積物,沉積于被涂工件上。4、電滲(脫水):涂料固體與工件表面上的涂膜為半透明性的,具有多數毛細孔,水被從陰極涂膜中排滲出來,在電場作用下,引起涂膜脫水,而涂膜則吸附于工件表面,而完成整個電泳過程。
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在外電場作用下,膠體微粒在分散劑中會向陽極或陰極作定向移動的現象。說明膠體微粒帶有電荷。如fe(oh)3膠體微粒帶陽電荷,在電場作用下,會向陰極移動。廣泛應用于陶瓷工業中黏土的凈化,工廠除塵和醫院臨床診斷等方面。電泳的過程電泳分為以下四個過程:1、電解(分解):在陰極反應最初為電解反應,生成氫氣及氫氧根離子OH ,此反應造成陰極面形成一高堿性邊界層,當陽離子與氫氧根作用成為不溶于水的物質,涂膜沉積,方程式為:H2O→OH+H2、電泳動(泳動、遷移):陽離子樹脂及H+ 在電場作用下,向陰極移動,而陰離子向陽極移動過程。3、電沉積(析出):在被涂工件表面,陽離子樹脂與陰極表面堿性作用,中和而析出不沉積物,沉積于被涂工件上。4、電滲(脫水):涂料固體與工件表面上的涂膜為半透明性的,具有多數毛細孔,水被從陰極涂膜中排滲出來,在電場作用下,引起涂膜脫水,而涂膜則吸附于工件表面,而完成整個電泳過程。
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電泳是什么帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。電泳原理電泳是電泳涂料在陰陽兩極,施加于電壓作用下,帶電荷的涂料離子移動到陰極,并與陰極表面所產生的堿性物質作用形成不溶解物,沉積于工件表面。它包括四個過程:電解、電泳動、電沉積、電滲。應用1.聚丙烯酰胺凝膠電泳可用做蛋白質純度的鑒定.聚丙烯酰胺凝膠電泳同時具有電荷效應和分子篩效應,可以將分子大小相同而帶不同數量電荷的物質分離開,并且還可以將帶相同數量電荷而分子大小不同的物質分離開。其分辨率遠遠高于一般層析方法和電泳方法,可以檢出10-9~10-12g的樣品,且重復性好,沒有電滲作用.2.SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可測定蛋白質分子量.其原理是帶大量電荷的SDS結合到蛋白質分子上克服了蛋白質分子原有電荷的影響而得到恒定的荷/質比。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測蛋白質分子量已經比較成功,此法測定時間短,分辨率高,所需樣品量極少(1~100μg),但只適用于球形或基本上呈球形的蛋白質,某些蛋白質不易與SDS結合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此時測定結果就不準確.3.聚丙烯酰胺凝膠電泳可用于蛋白質定量。電泳后的凝膠經凝膠掃描儀掃描,從而給出定量的結果.凝膠掃描儀主要用于對樣品單向電泳后的區帶和雙向電泳后的斑點進行掃描。4.瓊脂或瓊脂糖凝膠免疫電泳可用于①檢查蛋白質制劑...
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湖南電泳線電泳電泳漆膜具有涂層豐滿、均勻、平整、光滑的優點,電泳漆膜的硬度、附著力、耐腐、沖擊性能、滲透性能明顯優于其它涂裝工藝。詳細特點:(1)采用水溶性涂料,以水為溶解介質,節省了大量有機溶劑,大大降低了大氣污染和環境危害,安全衛生,同時避免了火災的隱患;(2)涂裝效率高,涂料損失小,涂料的利用率可達90%~95%;(3)涂膜厚度均勻,附著力強,涂裝質量好,工件各個部位如內層、凹陷、焊縫等處都能獲得均勻、平滑的漆膜,解決了其他涂裝方法對復 雜形狀工件的涂裝難題;(4)生產效率高,施工可實現自動化連續生產,大大提高勞動效率;(5)設備復雜,投資費用高,耗電量大,其烘干固化要求的溫度較高,涂料、涂裝的管理復雜,施工條件嚴格,并需進行廢水處理;(6)只能采用水溶性涂料,在涂裝過程中不能改變顏色,涂料貯存過久穩定性不易控制。(7)電泳涂裝設備復雜,科技含量較高,適用于顏色固定的生產。
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電泳現象 在確定的條件下,帶電粒子在單位電場強度作用下,單位時間內移動的距離(即遷移率)為常數,是該帶電粒子的物化特征性常數。不同帶電粒子因所帶電荷不同,或雖所帶電荷相同但荷質比不同,在同一電場中電泳,經一定時間后,由于移動距離不同而相互分離。分開的距離與外加電場的電壓與電泳時間成正比。在外加直流電源的作用下,膠體微粒在分散介質里向陰極或陽極作定向移動,這種現象叫做電泳。利用電泳現象使物質分離,這種技術也叫做電泳。膠體有電泳現象,證明膠體的微粒帶有電荷。各種膠體微粒的本質不同,它們吸附的離子不同,所以帶有不同的電荷。瑞正電泳,在湖南電泳應用領域電泳已日益廣泛地應用于分析化學、生物化學、臨床化學、毒劑學、藥理學、免疫學、微生物學、食品化學等各個領域。在直流電場中,帶電粒子向帶符號相反的電極移動的現象稱為電泳(electropho-resis)。1807年,由俄國莫斯科大學的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)首先發現了電泳現象,但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分離蛋白質的界面電泳(boundary electrophoresis)之后,電泳技術才開始應用。上世紀60-70年代,當濾紙、聚丙烯酰胺凝膠等介質相繼引入電泳以來,電泳技術得以迅速發展。豐富多彩的電泳形式使其應用十分廣泛。電泳技術除了用于小分子物質的分離...
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